Par
Jean Jacques Matamabudi Onkun
Psychologie et Société Nouvelle, Volume XVIII, n°3
Résumé
Les analyses hématologiques jouent un rôle
indispensable dans le diagnostic d’orientation de plusieurs affections. Les
cellules sanguines en général et les globules blancs en particulier, peuvent
varier soit morphologiquement soit numériquement au cours des altérations
d’origine diverse. Ainsi, la détermination de leur nombre ou de leur valeur par
unité de sang parait nécessaire pour affirmer ou infirmer la présence d’une
pathologie humaine.
Dans ce travail, nous avons comparé les résultats
de la numération des globules blancs en utilisant deux solutions diluants
différentes : la solution de Turk et l’acide phosphorique à 2%. A l’issu
de ces analyses, les deux solutions ont présenté les mêmes résultats. Donc
l’acide phosphorique à 2% peut être utilisé au lieu et la place de la
résolution de Turk qui est couramment utilisées.
Introduction
La numération des globules blancs figure parmi les
analyses hématologiques les plus demandées en clinique. Les globules blancs
peuvent varier soit morphologiquement soit numériquement au cours des
altérations d’origine diverse. Ainsi la détermination de leur nombre ou de leur
valeur par unité du sang parait nécessaire pour affirmer ou infirmer la
présence ou l’absence d’une pathologie humaine. De ce fait, une méthode d’analyse
systématique serait fondamentalement un moyen beaucoup plus approprié pour
l’établissement d’une détermination.
Cependant, les méthodes utilisées pour évaluer
normalement les leucocytes par unité de sang peuvent induire à des incertitudes
énormes et par conséquent fausser la démarche ainsi que les résultats, car
elles dépendent fondamentalement de la nature des réactifs et de leur mode
d’action sur les autres cellules sanguines. Et ces méthodes restent, enfin de
compte, si différentes les unes des autres.
La solution hémolysante appliquée aux méthodes
d’analyse utilisées couramment dans nos milieux est la solution de Turk diluée
à 2%. Celle-ci permet de faire la numération des globules blancs grâce à
laquelle le clinicien fait une interprétation correcte et compréhensive sur les
pathologies.
Dans le cadre de nos recherches au laboratoire, il
est avéré que l’hôpital général de référence de Bandundu-ville, en cas
d’absence de la solution de Turk, était limité à faire la numération des
globules blancs et devait attendre sa commande des autres laboratoires
d’ailleurs. À la suite de cette difficulté, une solution intermédiaire s’est
imposée, c’est-à-dire utiliser l’acide phosphorique comme solution hémolysante.
Au regard de ce qui précède, une constatation
mérite d’être soulevée pour élucider davantage notre étude : est-ce que
l’acide phosphorique en tant que solution hémolysante aboutit-elle à la
numération normale des globules blancs ? Ou encore ces deux solutions
hémolysantes parviendront-elles à un même résultat d’interprétation utile au
clinicien pour un bon suivi de son patient ? Une telle étude menée entre
deux méthodes d’analyses, évoluerait-elle numériquement la valeur du
constituant tant recherché sur le même échantillon ?
Eu égard à un tel questionnement, nous estimons
qu’une étude systématique entre deux solutions hémolysantes s’avère nécessaire
pour aboutir à une conclusion beaucoup plus sûre dans l’interprétation des
données. En cas d’absence de la solution de Turk, avec l’acide phosphorique à
2%, on pourrait faire la numération des globules blancs et obtenir des bons
résultats. En plus, une comparaison sur les deux techniques précitées nous
parait capable dans l’évaluation numérique des leucocytes sanguins.
1. Matériel
1.1. Matériel
biologique
L’outil biologique nécessaire dont nous nous
sommes servis pour la réalisation de cette étude est le sang capillaire et
veineux prélevé chez les malades reçus au laboratoire de l’hôpital général de
référence de Bandundu venus pour les examens paracliniques.
1.2. Matériel de
laboratoire
Pour réaliser cette étude, le matériel de
laboratoire utilisé a été celui de prélèvement, de dilution et d’analyse.
- 2 tubes à essai ;
- 1 portoir ;
- Des lancettes stériles ;
- Des aiguilles stériles montées sur des
seringues ;
- 2 lames propres ;
- 1 pipette pour globules blancs ;
- Ouate hydrophile ;
- Garrot ;
- 1 cellule de Neubawer ;
- Microscope ;
- 2 solutions hémolysantes : solution de Turk à
2% et l’acide phosphorique à 2% ;
- Solution de l’EDTA (anticoagulant).
2. Méthodes
Une recherche scientifique digne de son nom ne
peut atteindre les objectifs qu’elle s’est fixée si elle ne se donne une ligne
de conduite traduite en termes de méthodes. Comme méthode, nous avons utilisé
celle qui a été à la fois comparative, documentaire et statistique.
Population et
échantillon
Notre étude a porté sur une population de 300
malades. De cette population, on a tiré un sondage aléatoire simple à partir de
la fraction du sondage de un à cent (1 à 100), ce qui fait que l’étude a porté
sur 30 malades dont l’âge varie de 0 à 65 ans, sans distinction de sexe.
Technique de
prélèvement
Le prélèvement est soit veineux et le sang est
recueilli sur EDTA, soit capillaire et immédiatement dilué dans la solution
hémolysante. La numération est soit manuelle ; après la dilution dans un
liquide qui lyse les globules rouges, tout en préservant les globules blancs,
solution d’acide acétique à 2% (liquide de Turk) à la solution d’acide
phosphorique à 2%, comptage au microscope des leucocytes contenus dans une
cellule des Neubawer améliorée, soit automatique, dilution automatique dans un
liquide isotonique et tamponnée, dépourvue des particules, puis aspiration à
travers l’orifice d’une soude. Le passage de chaque cellule crée une
modification de la résistivité, proportionnelle au volume de la cellule (type
coulter count or sysmex KX-21N autonome).
La dilution en cas de comptage manuel est de 1/20
et le nombre des leucocytes comptés doit être multiplié par 50, car on compte
ceux-ci dans 4 grands carrés (dites secondaires). Contrairement à la solution
d’acide phosphorique, le liquide de Turk présente le désavantage à cause de
l’acide acétique qu’il contient : ceux-ci endommagent progressivement les leucocytes,
de telle sorte que la numération soit être effectuée aussi rapidement que
possible ; la destruction des leucoytes est déjà d’environ 8% dans une
heure et de 11,5% après deux heures ; de plus la présence de volet de
gentiane rend plus difficile le nettoyage de la chambre à numération.
Prélèvement du
sang veineux
Au niveau du dos de la main ou au bras ou encore à
l’avant-bras visualiser la veine la plus saillante :
- Serré la garrot puis ;
- Désinfecter l’endroit de prélèvement ;
- Introduire l’aiguille montée sur une seringue dans
la veine ;
- Aspirer le sang jusqu’à la quantité voulue.
Prélèvement du
sang capillaire :
- Désinfecter le doigt (le majeur ou l’annulaire) à
l’aide de l’ouate inhibé d’alcool ;
- Laisser évaporer l’alcool puis ;
- D’un coup franc et sec ; piquer l’endroit
désinfecter ;
- Prélever une goutte de sang puis la déposer sur
une lame porte-objet.
Technique de
dilution :
- Rapidement, aspirer le sang à l’aide d’une pipette
jusqu’au trait 20ul, puis diluer avec 0,4ml de la solution hémolysante (solution
de Turk ou l’acide phosphorique) ;
- Laisser reposer la solution pendant au moins 3
minutes.
Analyse
Principe
Le principe est d’analyser le sang dilué par la
solution de Turk ou l’acide phosphorique à 2% qui détruit les globules rouges
et les plaquettes tout en laissant intacts les globules blancs.
Technique :
- Mettre l’échantillon dans la chambre de la cellule
hématimètre en remplissant tous les 4 carrés de la cellule ;
- Placer la cellule sur la platine du microscope et
chercher le champ à l’objectif 10x ;
- Une fois la chambre visualisée, compter les
globules blancs trouvés dans les 4 carrés de la cellule et les multiplier par
50 ;
Valeurs de
référence
- Adulte : 4.000 à 10.000 GB/mm3
- Enfant : 4.000 à 10.000 GB/mm3
- Nourrisson : 4.000 à 15.000 GB/mm3
- Nouveau-né : 4.000 à 20.000 GB/mm3
3. Résultats et
discussion
Pour illustrer nos résultats ; le tableau 1
ci-dessous donne ces résultats de la numération des globules blancs obtenus à
partir de la solution de Turk.
Tableau 1. Résolution de la numération des
globules blancs à partir de la solution de Turk
|
NGB
|
fréquence
|
%
|
|
3.103 - 5.103 mm3
|
2
|
6,7
|
|
5,1.103 - 7.103 mm3
|
9
|
30
|
|
7,1.103 - 9.103 mm3
|
9
|
30
|
|
9,1.103 - 11.103 mm3
|
7
|
23,3
|
|
11,1.103 mm3 et plus
|
3
|
10
|
|
Total
|
30
|
100
|
Au regard du tableau 1 ci-dessus, deux patients
sur 30 soit 6,7% ont présenté des valeurs comprises entre 3.000 et 5.000 GB/mm3 ;
neuf patients ; soit 30% ont présenté des valeurs comprises entre 5.100 et
7.000 à GB/mm3, neuf autres patients dans la valeur des globules
blancs va de 7.100 à 9.000 mm3, sept patients, soit 23,3% ont
présenté des valeurs allant de 9.100 à 11.000 GB/mm3 et enfin trois
patients, soit 10% dont la valeur va de 11.100 GB/mm3 et plus.
En nous référant aux valeurs de référence, un
patient, soit 3,3% a présenté une leucopénie (une valeur en dessous de 4.000
GB/mm3) ; 24 patients, soit 80% ont présenté des valeurs
normales (entre 4.000 et 10.000 GB/mm3), tandis que 5 patients, soit
16,7% ont présenté une leucocytose (valeurs supérieures à 10.000 GB/mm3).
Tableau 2. Résultats de la numération des globules
blancs à partir de l’acide phosphorique.
|
NGB
|
fréquence
|
%
|
|
3.103 - 5.103 mm3
|
3
|
10
|
|
5,1.103 - 7.103 mm3
|
9
|
30
|
|
7,1.103 - 9.103 mm3
|
8
|
26,7
|
|
9,1.103 - 11.103 mm3
|
8
|
26,7
|
|
11,1.103 mm3 et plus
|
2
|
6,6
|
|
Total
|
30
|
100
|
Du tableau 2 relatif aux résultats obtenus à
partir de l’acide phosphorique à 2%, il est à noter que 3 patients sur 30 sur
10% ont présenté des valeurs comprises entre 3.000 et 5.000 GB/mm3 :
- 9 patients, soit 30% dont la valeur des globules
blancs va de 5.100 à 7.000 /mm3 ;
- 8 patients, soit 26,7% ont présenté des valeurs
comprises entre 7.100 et 9.000/mm3 ;
- 8 autres patients ont présenté des valeurs allant
de 9.100 à 11.000/mm3 et enfin ;
- 2 patients, soit 6,6% ont présenté des valeurs
égales ou supérieures à 11000 GB/mm3.
Donc avec l’acide phosphorique à 2%, un patient,
soit 3,3% a présenté une leucopénie (valeur inférieure à 4.000 GB/mm3)
23 patients, soit 76,7% ont présenté des valeurs normales (entre 4.000 et
10.000 GB/mm3) et enfin 6 patients, soit 20% ont présenté une
leucocytose (des valeurs supérieures à 10.000 GB/mm3.
Tableau 3 : Comparaison des résultats de la
numération des globules blancs obtenus à partir de la solution de Turk et à
partir de l’acide phosphorique à 20%.
|
Réactifs
NGB
|
Turk
|
Acide phosphorique
|
Total
|
|
3.103 - 5.103 mm3
|
2
|
3
|
5
|
|
5,1.103 - 7.103 mm3
|
9
|
9
|
18
|
|
7,1.103 - 9.103 mm3
|
9
|
8
|
17
|
|
9,1.103 - 11.103 mm3
|
7
|
8
|
15
|
|
11,1.103 mm3 et plus
|
3
|
2
|
5
|
|
Total
|
30
|
30
|
06
|
Du tableau 3, relatif à la comparaison des
résultats obtenus à partir de deux solutions hémolysantes, il est à noter
ceci :
- Avec la solution de Turk 2 patients sur 30 ont
présenté des valeurs comprises entre 3.000 et 5.000/mm3 ,
tandis qu’avec l’acide phosphorique, 3 patients se trouvent dans cette
fourchette ;
- Entre 5.100 et 7.000/mm3 , les
deux réactifs ont présenté 9 cas ;
- De 7.100 à 9.000 GB/mm3 , la
solution de Turk avait présenté chacun 9 cas, tandis qu’avec l’acide
phosphorique, nous avons enregistré 8 cas ;
- De 9.100 à 11.000 /mm3 ,7 cas ont
été enregistrés avec la solution de Turk et 8 cas avec l’acide phosphorique à
2% et enfin à partir de 11.100 /mm3 et en plus, 3 cas ont été
enregistrés avec la solution de Turk contre 2 cas avec l’acide phosphorique à
2%.
Discussion
Au cours de notre étude sur la comparaison des
résultats de la numération des globules blancs obtenus à partir de la solution
de Turk d’une part et d’autre part à partir de l’acide phosphorique à 2%, 30
échantillons ont été soumis à l’examen.
Après comptage des globules blancs, avec la
solution de Turk un patient a présenté une leucopénie (valeur inférieur à 4.000 /mm3 ),
24 patients, soit 80% dont leurs valeurs ont été dans la fourchette de la
normalité c’est-à-dire entre 4.000 et 10.000/mm3 et 5 patients,
soit 16,7% ont présenté une leucocytose (valeurs supérieures à 10.000/mm3).
Avec l’acide phosphorique à 2%, la leucopénie a été enregistrée chez un seul
patient. Quant aux valeurs normales, ici, 23 patients, soit 76,7% ont été dans
cette fourchette et enfin 6 patients soit 20% ont présenté une leucocytose.
En comparant les résultats obtenus à partir de ces
deux solutions hémolysantes, un seul patient a présenté une leucopénie avec les
deux solutions, 5 patients ont présenté une leucocytose avec solution de Turk
contre 6 patients avec l’acide phosphorique à 2%, pendant que 24 patients avec
solution de Turk et 23 patients
avec l’acide phosphorique à 2% ont présenté des valeurs normales c’est-à-dire
comprises entre 4.000 et 10.000/mm3.
Les différences non significatives constatées être
dues soit à la dilution, soit ou comptage manuel.
Conclusion
L’objectif principal de notre recherche consistait
à vérifier si l’acide phosphorique à 2% donnerait des résultats comparables à
ceux obtenus avec la solution de Turk.
A cet effet, 30 échantillons ont été soumis aux
analyses. Après lecture de ces échantillons, nous avons constaté avec beaucoup
de satisfaction que les résultats fournis par l’acide phosphorique à 2% ne se
sont pas écartés de ceux fournis par la solution de Turk. Donc l’acide
phosphorique à 2% peut être utilisé à l’absence de la solution de Turk.
Recommandation
Sans nous contredire, nous savons bel et bien
que la solution de Turk est le seul réactif qui est utilisé pour la numération
des globules blancs.
Les essais réalisés avec l’acide phosphorique à 2%
ont donné des résultats très satisfaisants.
À la suite de certains inconvénients que présente
la solution de Turk (la présente de l’acide acétique qui endommage progressivement
les leucocytes et de violet de gentiane qui rend difficile le nettoyage de la
chambre à numération), nous demanderons :
- Aux techniciens de laboratoire d’utiliser l’acide
phosphorique à 2% au lieu et place de la solution de Turk ;
- Aux institutions sanitaires d’équiper leurs
laboratoires en acide phosphorique afin de résoudre le problème de rupture en
réactifs que connaissent certains laboratoires.
Bibliographie
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d’hématologie. Paris : éd. Masson.
Choquet (2002). Hématologie. Paris :
éd. Eclipses.
Herrera A. et Socal-Celigny PH. (1985). Hématologie.
Paris : éd. Malaires S.A.
Kamoun P. et Frejaville J.P. (1993). Guide des
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Mbayo Kalumbu (1996). Biologie médicale appliquée.
Kinshasa : éd. Presse universitaire.
Mehta A.B et Hoffraband A.V. (2003). Hématologie.
Bruxelles : éd. De Boeck.
OMS (1982). Manuel des techniques de base pour le
laboratoire médical.
Vanros (1981). Hématologie. IMT.
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